1.先从液氮罐内迅速拿出需要复苏的细胞,迅速放入37摄氏度的水浴中,并不停的判基滚摇晃,注意瓶口不要碰到水面,以防污染细胞;2.将盛入37摄氏度水浴中的细胞连同烧杯一起带入细胞房,待细胞均匀融化后,拿出;3.将细胞悬液倒入离心管,加入3-4滴完全培养基,放入离心机中离心1500转(调两档),3-4min,观察细胞沉淀情况,如果太少,再次离心3-4min;4.将离心管拿出,倒掉上清液,在离心管中锋帆加入2滴培养液,并用弯头滴管伸入液面以下不断吹打(注意不要将弯头伸出液面,以防有气泡产生,影响细胞生长);5.将新的细胞培养瓶中加入两滴管培养液,再将离心管中的细胞转入新的细胞培养瓶(以防加入时产生气泡)并使细胞散步均匀;6.用酒精擦拭瓶身,显微镜观察细胞形态(有透明的圆的细胞漂浮其中),培养瓶上写明日期及培养细胞的名称;7.将培养瓶的盖子稍松,放入CO2培养(便于CO2进入)待第二天观察(细胞一般4小掘余时贴壁);
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