什么是感态细胞,它有什么特点,它如何制备？

什么是感受态细胞（Competentcell）

细胞处于能吸收外源DNA的状态称感受态 经特殊处理后处于此状态的细胞称感受态细胞

作感受态细胞应具备什么特点

（1）细胞表面暴露出一些可接受外来DNA的位点（以溶菌酶处理 可促使受体细胞的接位点充分暴露）

（2）细胞膜通透性增加（用钙离子处理 可使膜通透性增加 使DNA直接穿过质膜进入细胞

（3）受体细胞的修饰酶活性最高 而限制酶活性最低 使转入的DNA分子不易被切除或破坏

感觉态细胞可以用来做什么

将构建好的载体转入感受态细胞进行表达（转化） 不仅可以检验重组载体是否构建成功 最主要的是感受态细胞作为重组载体的宿主可以进行后续实验 如蛋白质表达纯化等工作

制备感受态的方法

电击法 化学方法 CaCl2制备法 录化锂制备法（毕氏酵母）

电击法与CaCl2制备法的区别

原理

电击法利用瞬时高压电流（数千伏特）处理细胞悬浮液 使微生物细胞膜在高压电作用下发生去极化 产生微孔 悬液中溶解的核酸即可通过细胞膜上的空洞进入细胞内部

CaCl2法利用低渗溶液处理细胞悬浮液微生物细胞膜结构发生变化 使得细胞在热激时（42•C 90时）变得容易从溶液中摄取DNA其他

做电击转化时 悬液中会有大部分细胞会因电击而死亡 但是这种方法很直接 转化效率很高 另外 需要专门的仪器

化学转化法操作简单 不需要特殊设备 转化效率足以一般克隆实验需要 故使用范围非常广

下面详细介绍CaCl2制备法CaCl2制备法

原理

在CaCl2溶液中 细胞会发生膨胀 Ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构 促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来 离开所在区域 诱导细胞成为感受态细胞

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