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液氮保存的叶片中苯丙氨酸解氨酶会失活吗?测酶活不是要用鲜样吗?

2023-08-14 19:56:01 编辑:join 浏览量:588

液氮保存的叶片中苯丙氨酸解氨酶会失活吗?测酶活不是要用鲜样吗?

不会的

温度对酶活性的影响是这样的,高温酶使酶失活。是因为蛋白质的变性,是不可逆的,低温酶使酶活性降低是低温使分子运动减弱,从而使酶和底物结合率降低,反应速率就降低,这个可逆。

测酶活不一定需要鲜样,只要有活性就可以经行测定,我们选择鲜样的原因是因为,鲜样的酶活性较好现象明显。

(1)蛋白质的不同对测定结果的影响。由于蛋白质是生物大分子,而紫外吸收往往是其分子内的小基团所引起的,例如酪氨酸、苯丙氨酸,色氨酸和肽键等等。因此当蛋白质不同,其包含的上述小基团含量发生变化时,就会影响蛋白质含量的测定。然而蛋白质种类繁多,结构复杂,很难对其进行有效的归类。例如人体内含蛋白质的种类约有10万种,整个生物界的蛋白质种类估计有100亿种。建议:测量过程中如果条件允许,应尽量使用相近的蛋白质做标准曲线,修正测量参数,以便得到更为准确的数值。(2)溶液中干扰物质的影响。由于蛋白质所包括的具有紫外吸收的小基团为常见基团,其产生紫外吸收的特异性并不强,很多具有类似结构的有机溶剂都会有类似的紫外吸收,如醇、酮、醛、醚、有机酸、酰胺类,这些混入蛋白质溶液都会对测量产生干扰。另外,一些高浓度的无机化合物也会对蛋白质的含量测定产生干扰,例如naoh、naci等等。建议:测量时应尽量排除干扰物质,同时选择合适的参比溶液。(3)溶剂吸收的影响。如果以一些在紫外区有吸收的物质做溶剂(例如醇、酮类),会对测量结果产生很大的影响。建议:测量时尽量不要使用此类溶剂,或者在测量时选择合适的参比。(4)ph对测定的影响。ph变化时对蛋白质含量测定的影响非常大,例如:下图为tyr的吸收谱线与ph的关系。由图可以发现,ph=6和ph=13时,光吸收度已经有了非常大的差异。lmaxatph6:274nmlmaxatph13:295nm建议:测定样品时不要使溶液处于过酸或者过碱的状态,同时样品的ph值要与标准品的ph值尽量保持一致。(5)环境极性、蛋白质构象、蛋白质折叠与变性都会对蛋白含量的测定产生影响。

标签:解氨酶,失活,测酶活

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